Cultura si identificare fungi cu antifungigrama

Informatii generale

Fungii sunt organisme eucariote, uni sau pluricelulare, heterotrofe, care contin chitina in peretele
celular.

Pentru clasificarea fungilor, criteriul morfologic este cel mai cunoscut si acceptat in micologia
medicala. Acesta permite impartirea fungilor in trei tipuri principale:

  •  filamentosi: mircoorganisme pluricelulare, cu talul alcatuit din filamente tubulare ce pot fi septate, denumite hife;
  • levuriformi: microorganisme unicelulare, de forma rotunda sau alungita ce se multiplica in principal prin burjeonare;
  • dimorfici: o categorie aparte de microorganisme, care pot aparea sub 2 forme, in functie de
  • conditiile de mediu: forma de levuri se gaseste in tesuturile organismelor parazitate sau la 37°C
  • in vitro, iar forma filamentoasa apare cand sunt cultivate la temperatura camerei sau la 30°C, pe medii uzuale.

Levurile pot fi izolate din produsele patologice primite in laboratorul clinic in urmatoarele situatii:

  • contaminarea probei prin manevre defectuoae in cursul prelevarii;
  • colonizarea cu levuri a unor suprafete (tegument, mucoase) sau cavitati;
  • infectia cu aceste microorganisme.

Principalele indicatii ale testarii

  • Infectii fungice cu levuri.
  • Suspiciunea unei dermatite cu Malassezia spp.

Contraindicatii

Infectii cu dermatofiti (Trychophyton spp., Microsporum spp.). In cazul unei asemenea suspiciuni va
rugam sa solicitati serviciul aferent.

Pregatiri speciale pentru recoltare

Nu.

Specimen recoltat

Desi aproape orice tesut sau fluid poate fi supus izolarii si identificarii fungice, cele mai importante
specimene sunt reprezentate de: sputa, exsudat faringian, tegument, secretii genitale, aspirat
transtraheal si lichid pleural, tesuturi din plagi, lichid cefalorahidian, sange, urina si materii fecale.

Recipient de recoltare

Tub steril cu mediu de transport gel sau lichid (Amies).

Prelucrarea necesara dupa recoltare

Se pastreaza exclusiv la temperatura camerei. Nu se refrigereaza.

Desi probele prelevate pe mediu de transport au o stabilitate extinsa, se recomanda a se trimite catre
laborator in maximum 2 ore de la prelevare pentru o mai sigura recuperare a microorganismelor
urmarite.

Va rugam sa mentionati pe cererea de analize care acompaniaza proba orice informatie clinica sau
observatie care poate indruma medicul de laborator in selectarea metodei potrivite de procesare a
specimenului (alegerea mediului de cultura corespunzator, conditiilor de incubare etc). De asemenea
va rugam sa mentionati orice tratament antifungic administrat animalului.

Protocol

Prelevarea de pe tegument (pentru Malassezia spp.) presupune recoltarea de raclat cutanat.

Secretiile recoltate din cavitatile naturale care comunica cu exteriorul se preleveaza cu ajutorul
tamponului de recoltare.

Sangele se recolteaza direct cu seringa si se transfera intr-un recipient special destinat culturilor din
sange (solicitati laboratorului acest recipient), in raport de 1 mL sange/9 mL mediu.

Urina se recolteaza prin cistocenteza percutanata, care asigura un specimen necontamint cu flora
bacteriana sau fungica din tractul urinar inferior.

Toate lichidele si lichidele de punctie se recolteaza cu ajutorul unei seringi sterile si se transfera intr-
un recipient steril, fara aditivi/mediu.

Stabilitate proba

2 ore pentru recipientele fara mediu (lichide si lichide de punctie).
24 ore pentru recipientele cu mediu de transport gel.
48 ore pentru recipientele cu mediu de transport lichid.

Metoda

Examen microscopic, insamantare pe medii de cultura, incubare, replicare si identificare.

Interferente

Rezultate negative:

  • Nerespectarea pregatirilor speciale inainte de recoltare.
  • Recoltarea necorespunzatoare a probei (protocol necorespunzator, recipiente necorespunzatoare etc).
  • Depozitarea probei la temperatura necorespunzatoare sau depasirea timpului de stabilitate.
  • Administrarea de antiseptice sau antibiotice locale sau generale.
  • Infectie de alta natura decat micotica (bacteriana, parazitara, virala).

Rezultate pozitive:

  • Recoltarea necorespunzatoare a probei (contaminarea probei) – rezultate fals pozitive.

Interpretare

In cazul prelevatelor din situsuri normal sterile, prezenta levurilor indica infectie, daca s-au luat toate
masurile de prevenire a contaminarii in timpul recoltarii. In cazul probelor provenite din situsuri
nesterile, cu flora microbiana proprie, coroborarea datelor clinice, epidemiologice si de laborator este
absolut necesara epntru interpretarea semnificatiei clinice a levurilor.

Timp de eliberare rezultat

5 – 7 zile.

Teste complementare recomandate

In functie de tabloul clinic si suspiciunea medicului veterinar curant.

Bibliografie

1. Ghidul Serviciilor Medicale al Laboratoarelor Synevo, editia II.
2. Infectious Diseases of The Dog and Cat, Greene C.E., editia IV, Elsevier, 2012.